列奥纳多在安德烈·德尔·韦罗基奥的学徒生涯中开始了对人体解剖学的研究，韦罗基奥要求学生对该学科有深刻的了解。作为一名艺术家，他很快掌握了地形解剖学，绘制了许多关于肌肉、肌腱和其他可见解剖特征的研究图稿。
作为一名成功的艺术家，列奥纳多获准在佛罗伦萨的圣玛丽亚诺瓦医院，以及后来的米兰和罗马的医院解剖人体尸体。从1510年到1511年，他与医生马尔坎托尼奥·德拉·托雷合作进行了研究。列奥纳多绘制了240多幅详细的图稿，并撰写了约13,000字的解剖学论文。只有少量关于解剖学的材料被收录在列奥纳多的《绘画论》中。
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