في 4 مارس عام 1868، وسط اهتمام عام هائل وتغطية صحفية، تم تقديم الوثائق الإحدى عشرة من الإقالة إلى مجلس الشيوخ، الذي انعقد في اليوم التالي كمحكمة عزل، برئاسة رئيس القضاة سالمون تشيس، وشرع في تطوير مجموعة من قواعد المحاكمة وضباطها.
كان جونسون غاضبًا من جرانت، واتهمه بالكذب خلال اجتماع مجلس الوزراء العاصف. أدى نشر العديد من الرسائل الغاضبة في مارس عام 1868 بين جونسون وغرانت إلى انقطاع كامل بينهما. نتيجة لهذه الرسائل، عزز جرانت مكانته باعتباره المرشح الأوفر حظًا لترشيح الحزب الجمهوري للرئاسة عام 1868.
تألفت لجنة الإقالة في مجلس النواب من: جون بينغهام ، وجورج س. بوتويل، وبنجامين بتلر، وجون إيه لوغان، وتاديوس ستيفنز، وجيمس إف ويلسون، وتوماس ويليامز. تألف فريق دفاع الرئيس من هنري ستانبيري وويليام إم إفارتس وبنجامين آر كورتيس وتوماس إيه آر نيلسون وويليام إس. بناءً على نصيحة المحامي، لم يمثل الرئيس في المحاكمة.
المحاكمة كانت تجرى في الغالب في جلسة علنية، وامتلأت صالات مجلس الشيوخ بكامل طاقتها طوال الوقت. كانت المصلحة العامة كبيرة لدرجة أن مجلس الشيوخ أصدر تصاريح القبول لأول مرة في تاريخه. في كل يوم من أيام التجربة، تمت طباعة 1,000 تذكرة، ومنحت الدخول ليوم واحد.